丝瓜ISSR反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 叶新如

作者： 叶新如;朱海生;温庆放;刘建汀;王彬;陈敏氡;张前荣

作者机构：

关键词： 丝瓜;体系优化;ISSR

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2018 年 05 期

页码： 1551-1557

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以丝瓜基因组DNA为模板,对ISSR反应中主要5个影响因素Mg~(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度,建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为:25μL ISSR体系:50 ng DNA,0.2 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.4μmol/L的单条引物,2.5μL 10×Buffer,2.0 mmol/L Mg~(2+)。在此基础上,对12个引物的退火温度进行优化。最终选用60份丝瓜品种对所确定的扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高和重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的ISSR分子标记为丝瓜种质资源的鉴定、分类和丝瓜的杂交育种提供参考依据。

分类号： S642.4

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