多重荧光定量PCR检测猪圆环病毒2a、2b和2d基因型方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 钱雯娴

作者： 钱雯娴;肖琦;赵霞玲;温立斌;索朗斯珠;何孔旺

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;多重荧光定量PCR;检测;基因型

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 31 卷 004 期

页码： 74-81

摘要： 为建立一种检测猪圆环病毒2型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种基因型PCV2a、PCV2b、PCV2d检出并分型.针对3种基因型ORF2基因,在保守序列设计通用引物并分别设计特异TaqMan探针,3条探针分别标记NED、JOE和FAM荧光报告基团,建立多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其灵敏性、重复性和特异性.经条件优化多重荧光定量PCR的反应体系为30 μL,各型探针加样为0.6 μL,退火温度为60℃;最低检测值为PCV2a 100 copies/μL、PCV2b 57 copies/μL和PCV2d 100 copies/μL,而且该方法对猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等其他6种猪源主要病毒核酸检测均为阴性,具有良好的特异性;组内和组间的检测变异系数均小于等于3.6%;通过检测218份阳性样本,结果表明该方法能快速检测猪圆环病毒2型三种主要流行型并同时分型,为PCV2快速分型的诊断提供新方法.

分类号： S852.651

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