黄地老虎颗粒体病毒DNA片段在枯草芽孢杆菌中的克隆和启动氯霉素抗性基因表达
文献类型: 中文期刊
第一作者: 郭三堆
作者: 郭三堆;邱并生;裴美云;贾士芳;艾秀莲
作者机构:
关键词: 启动基因;黄地老虎颗粒体病毒;枯草芽孢杆菌
期刊名称: 生物工程学报
ISSN: 1000-3061
年卷期: 1985 年 1 卷 03 期
页码: 26-31,86
摘要: 黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulosis virus简称AsGV)DNA和pPL603质粒DNA,用限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ酶切后,再用T_4连接酶连接,转化枯草芽孢杆菌BR151感受态细胞。然后在10μg/ml氯霉素的SPBY选择平皿上筛选,得到了抗氯霉素的转化子。经过琼脂糖凝胶电泳检测,转化于中的重组质粒比原载体pPL603质粒分子量大。由于重组质粒上的抗性表达水平可达250μg/ml氯霉素,比pPL603质粒抗性表达水平(5μg/ml)提高50倍。所以重组质粒携带了有启动作用的DNA片段。启动功能片段的分子量,经琼脂糖凝胶电泳测定约为0.9kb。除进行DNA-DNA分子杂交确证外,并用重组质粒pAsGVP15进行了第二次转化、抗性水平测定和分子量分析。
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