接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库的构建与分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈文涛

作者： 沈文涛;周鹏

作者机构：

关键词： 番木瓜;PRSV;cDNA文库;酵母双杂交系统

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2008 年 29 卷 04 期

页码： 419-423

收录情况： CSCD

摘要： 利用Trizol法提取接种PRSV 4 d的番木瓜种苗总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,双链cDNA末端经Pfu-DNA聚合酶补平,与EcoR I接头连接,XhoI酶切消化产生粘端。用Sepharose CL-2B柱分离纯化去除小分子cDNA片段,再与pMyr酵母表达载体连接,转化受体菌XL10-Gold,构建了接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库。所获得的原始文库的克隆总数为1.8×106cfu,重组率为100%,文库滴度为2.6×109cfu/mL。对随机选取的34个克隆进行PCR鉴定,结果表明插入片段长度均大于0.5 kb且集中在1 kb左右。文库质量鉴定结果表明,该文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。

分类号： S436.67

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