H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨涛

作者： 杨涛;刘明;张云;刘春国;杜绍范

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;NS1基因;原核表达;酶联免疫吸附试验

期刊名称： 中国兽医科技

ISSN： 1000-6419

年卷期： 2005 年 35 卷 08 期

页码： 585-589

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。

分类号： S852.65

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