柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

文献类型: 中文期刊

第一作者: 王艳歌

作者: 王艳歌;董辉;韩红玉;赵其平;朱顺海;李榴佳;吴有陵;黄兵

作者机构:

关键词: 柔嫩艾美耳球虫;乳酸脱氢酶;IFN-γ基因;293T细胞;真核表达

期刊名称: 中国动物传染病学报

ISSN: 1674-6422

年卷期: 2014 年 02 期

页码: 65-71

摘要: 为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。

分类号: S858.31

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