双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔洪志

作者： 崔洪志;郭三堆

作者机构：

关键词： 双价载体，抗虫基因，植物转化，烟草抗虫性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 1998 年 01 期

页码： 7-13

收录情况： CSCD

摘要： 本文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展一转双价杀虫基因烟草的获得。用ＰＣＲ的方法对来自豇豆的胰蛋白酶抑制剂基因（ＣｐＴＩ）进行了修饰，在基因５’及３’端分别加入了克隆所需的ＰｓｔＩ和ＳｃａＩ限制性酶切位点，去除了原基因中５’端非翻译区序列，并进一步定点突变了基因内部存在的ＥｃｏＲＩ位点。序列分析表明了基因修饰的准确性。将该基因与人工合成的ＣＦＭＣｒｙＩＡＢ．ｔ．杀虫基因分别加在植物中可提高其转录和翻译能力的表达调控元件，同时构建到植物表达载体ｐＢＩＩ３１．１中，获得了两个高效双价杀虫基因植物表达载体ｐＧ－ＢＩ１３１Ｓ４ＡＢＣ及ＰＧＢＩ１３１Ｄ４ＡＢＣ。载体中用于提高目的基因转录和翻译的调控元件包括增强子序列、３５Ｓ启动子、序列、Ｋｏｚａｋ序列、多联终止密码子、正确切割和加工序列、Ｐｏｌｙ（Ａ）序列及ＮＯＳ终止子。该载体中还带有卡那霉素抗性选择标记基因和ＧＵＳ报告基因。通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草ＮＣ８０，获得了－批抗卡那霉素烟草植株。经ＧＵＳ及分子生物学检测，证实了双价杀虫基因在烟草中的整合与表达。生物学杀虫试验表明转双基因烟草植株具有高抗虫性。

分类号： S572

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