鸡传染性贫血病毒VP3基因的原核表达及抗血清制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙芬芬

作者： 孙芬芬;高玉龙;潘伟;王笑梅

作者机构：

关键词： 鸡传染性贫血病毒(CIAV);VP3蛋白;蛋白相互作用;原核表达;纯化;抗血清

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2019 年 13 期

页码： 1-6

摘要： 为了研究鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CIAV)VP3蛋白与病毒自身蛋白之间的相互作用,需对该蛋白进行原核表达制备相应兔源抗血清,试验通过提取CIAV M9905株基因组DNA,PCR扩增出VP3基因,构建重组质粒pET30a(+)-VP3,然后转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,进一步通过IPTG诱导表达后用Ni-NTA亲和柱纯化获得融合蛋白,经SDS-PAGE分析后对融合蛋白进行乳化,免疫新西兰兔制备抗血清,并对其进行ELISA效价测定、Western-blot及IFA检测.结果表明:SDS-PAGE分析证实获得高纯度的重组蛋白VP3,大小约为22 ku,且其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在;ELISA法检测制备的兔源抗VP3血清效价在1∶6 400以上;经Western-blot及IFA检测证实,VP3兔源血清可特异性结合Vero细胞表达的VP3蛋白.说明试验成功表达出CIAV VP3蛋白,制备的兔抗血清具有较好的特异性.

分类号： S852.65

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