日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐玉梅

作者： 徐玉梅;曹士德;朱传刚;张世清

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;谷胱甘肽-S-转移酶;霍乱毒素B亚基;杆状病毒;真核表达

期刊名称： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志

ISSN： 1000-7423

年卷期： 2019 年 3 期

页码： 364-367

摘要： PCR扩增日本血吸虫28 000谷胱甘肽-S-转移酶(Sj28GST)的主要抗原表位与霍乱毒素B亚基(CTB)的融合基因, CTB-Sj28GST经SalⅠ和SphⅠ双酶切后定向克隆至转移质粒pFastBac,构建重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST,转化DH10Bac感受态细胞进行基因的同源重组,提取重组病毒,用M13通用引物以及CTB-Sj28GST引物PCR鉴定阳性后转染草地贪夜蛾细胞(Sf9),收集亲代重组病毒反复感染Sf9细胞进行病毒扩增, PCR鉴定重组病毒.重组病毒感染细胞出现病变时,用抗Sj28GST多克隆抗体间接免疫荧光(IFA)鉴定重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定病毒感染细胞裂解液,分析重组蛋白的抗原性.研究结果表明, Sj28GST含有4个抗原表位,长189 bp,与CTB融合后长519 bp.重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST的PCR及序列鉴定与预期一致.Sf9转染细胞获得的重组病毒经PCR鉴定,获得与预期一致的519 bp片段.IFA鉴定表明,重组病毒感染的Sf9细胞呈现绿色荧光,未感染的对照细胞无绿色荧光.Western blotting鉴定在约Mr22 000处有特异性的蛋白条带,与预期目的蛋白大小一致.该重组蛋白能被抗Sj28GST多克隆抗体识别.

分类号： R392

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