布鲁菌分子标记菌壳株的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卜昭阳

作者： 卜昭阳;钱晶;梁佳茗;王莉;屈海龙;王晓旭;杨艳玲;王秀然;闫广谋;郎需龙;王兴龙

作者机构：

关键词： 犬布鲁菌;分子标记;细菌菌壳;同源重组;候选疫苗

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 8 期

页码： 1533-1539

摘要： 旨在构建一种安全、高效的犬布鲁菌分子标记疫苗株.本试验将温控裂解部件(TLC)插入布鲁菌自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419中,构建温控裂解型自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419-TLC;通过电转化方式转入犬布鲁菌RM6/66感受态中,经卡那抗性和蔗糖培养基的正、负向筛选,将TLC片段定点插入布鲁菌B0419基因中,获得犬布鲁菌分子标记菌壳株.采用PCR法对连续30代次的菌株进行鉴定,结果显示裂解E基因和靶向插入位点区域(B0419基因)并未出现丢失和回复突变现象,表明该菌壳株具有良好的遗传稳定性.该菌壳株在培养至D600值为0.6时,经42℃诱导60 h后,可获得裂解率达100%的犬布鲁菌菌壳;经超薄切片和染色处理后,在透射电镜观察下可见形态完整的空心结构,其内容物明显减少.本试验结合细菌菌壳技术与同源重组技术,成功构建了具有分子标记特征的犬布鲁菌菌壳株,为新型布鲁菌疫苗的研制提供策略.

分类号： S852.61

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