基于昆虫细胞表达的鹅细小病毒VP3蛋白的VP3-ELISA诊断方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈雪明

作者： 陈雪明;张树梅;林委卫;孙悦;陈秀红;呼喝巴特儿;刘明;葛明;张云

作者机构：

关键词： 鹅细小病毒;VP3基因;杆状病毒表达;VP3-ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 9 期

页码： 1112-1118

摘要： 将鹅细小病毒EP22株VP3基因克隆到杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTB中,酶切鉴定及测序筛选出阳性重组转座载体pFastBac-VP3,转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-VP3,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得到含鹅细小病毒VP3基因的重组杆状病毒rBV-VP3.经SDS-PAGE、Western-blot以及免疫组化试验证实,VP3基因在Sf9细胞中成功表达.利用表达的VP3蛋白建立VP3-ELISA血清学检测方法并对130份鹅血清样品进行检测,以中和试验作为金标准进行对比试验.结果显示,VP3-ELISA检测方法的特异性为100%,敏感性为96.2%,并且VP3-ELISA与其他鹅病阳性血清间不出现交叉反应性.上述研究结果表明,本研究建立的VP3-ELISA是一种特异的、灵敏的血清学诊断方法.

分类号： S852.65

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