猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧云文

作者： 欧云文;代军飞;马炳;张杰;邓辉祥;李潇;张欣明

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;Cap蛋白;多克隆抗体;鉴定

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2019 年 35 卷 8 期

页码： 226-231

摘要： 旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的多克隆抗体.以PCV2毒株(CAU0673)DNA为模板进行PCR,扩增目的片段大小约为702 bp,构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;对目的蛋白进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化、复性,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,经背部皮下多点注射4次,免疫新西兰大耳白兔,制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)验证兔抗血清特异性,并用间接ELISA测定抗血清抗体效价.PCR、双酶切和测序鉴定结果表明,重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确;重组Cap蛋白以包涵体的形式表达,大小约为34 kD,复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应,ELISA抗体效价>1:12800,显著高于商品化疫苗组.

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