针对非洲猪瘟病毒p30基因CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建和初步鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于海男

作者： 于海男;崔帅;王洋;刘雪婷;高新桃;房立春;郭晓宇;朱鸿飞

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;p30基因;CRISPR/Cas9;单导向RNA;真核表达

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 31 卷 002 期

页码： 59-66

摘要： 构建针对非洲猪瘟病毒(ASFV)p30(CP204L)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,探究该系统对p30蛋白真核表达的影响.以含p30基因序列的质粒p30-IRES为模板,定向扩增目的基因片段并克隆至pmCherry-N1载体,构建含有p30、红色荧光报告基因的融合表达质粒;通过网站http://crispr.mit.edu/设计靶向CP204L的单导向RNA(sgRNA),并克隆至Cas9表达质粒eSpCas9-2A-GFP(PX458)中.将融合表达质粒与Cas9表达质粒共转染HEK 293T细胞,同时设置对照组,转染48 h后通过Western blot和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测转染细胞中p30蛋白和mRNA表达水平.由于CRISPR/Cas9基因编辑系统靶向切割p30基因,Western blot和qPCR结果显示转染靶向p30基因的Cas9质粒后,p30蛋白的真核表达受到抑制,具有显著性差异(P<0.05).结果表明,CRISPR/Cas9基因编辑系统可以高效切割非洲猪瘟p30基因,抑制该蛋白的真核表达水平,该体系为抑制病毒生长和疫情防控提供了新的研究思路.

分类号： S852.651

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