拟穴青蟹苗种MCRV检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 金夕雨

作者： 金夕雨;李守湖;吴越;储旭;王伟;房文红;李新苍

作者机构：

关键词： 拟穴青蟹;MCRV;检测方法;TaqMan qRT-PCR;苗种

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2025 年 46 卷 004 期

页码： 230-237

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 拟穴青蟹(Scylla paramamosain)苗种携带青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus, MCRV)对后期养殖具有极大的风险。培育无MCRV苗种，从源头切断该病毒传播，已成为当前青蟹养殖中亟待解决的关键问题。为提高青蟹苗种MCRV检测的灵敏度，本研究选择MCRV的高表达基因VP11作为靶标，设计特异性引物和Taq Man-MGB探针，以标准品质粒和RNA为模板，通过优化反应体系和反应程序，建立了一种适用于青蟹苗种MCRV检测的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法，能够实现对MCRV的精准检测。在1×10～8～1×10～1 copies/μL标准品质粒(或dsRNA)的范围内，起始模板浓度对数值与反应循环数间呈良好的线性关系，最低可精确定量10 copies标准品质粒或dsRNA/反应的样品，该方法最低理论检测极限为2.5 copies标准品质粒/反应。以青蟹双顺反子病毒(MCDV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)、十足目虹彩病毒(DIV1)、虾肝肠胞虫(EHP)及副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)核酸样品作为模板进行检测，均未产生特异性扩增。该检测方法对质粒和dsRNA样品的变异系数分别为1.40%和0.98%，具有良好的重复性和稳定性。使用该方法和SYBR Green qRT-PCR方法同时对14份不同发育阶段蚤状幼体进行检测，MCRV检出率分别为78.57%和57.14%。上述研究结果表明，该检测方法稳定性好、特异性强、灵敏性更高，适用于不同发育阶段青蟹幼体的MCRV检测，可为无MCRV青蟹苗种的生产提供关键技术支撑。

分类号： S945

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