抗草胺膦bar基因原核表达和纯化及其免疫反应性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吕莉琨

作者： 吕莉琨;苏旭;王静;李闻;刘洪亮;卢长明

作者机构：

关键词： bar基因;BAR重组蛋白;原核表达;免疫反应性

期刊名称： 环境与健康杂志

ISSN： 1001-5914

年卷期： 2012 年 29 卷 11 期

页码： 31-34

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的实现抗草胺膦bar基因在原核表达系统中的高效表达及纯化,并分析其免疫反应性。方法将携带bar基因的重组质粒pET28a-bar转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,确定最佳诱导表达条件。获得的重组蛋白经镍亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠,测定抗体效价,以获得的抗BAR的抗血清作为一抗进行Western blot反应,检测蛋白的免疫反应性,分析该原核表达蛋白与转bar基因油菜中蛋白的等同性。结果利用原核表达系统成功实现了BAR重组蛋白的高效表达,其最适表达条件为:0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、20℃和120 r/min摇床转速诱导过夜。以纯化后的目的蛋白作为抗原免疫小鼠,得到抗BAR的抗血清。以间接ELISA法测定抗血清效价达1∶102 400,将其作为一抗进行Western blot反应,结果显示该抗体与原核表达的重组蛋白及转bar基因油菜中的BAR蛋白均能特异性结合。结论获得了高纯度的BAR重组蛋白,制备了特异性抗BAR多克隆抗体。原核表达的重组蛋白与转bar基因油菜中的BAR蛋白具有相同的免疫反应性,为进行转bar基因产品的食用安全性评价提供实验依据。

分类号： Q943.2

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