猪主要DNA病毒多重二温式PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 申世川

作者： 申世川;王一成;姜平;袁秀芳;徐丽华;李军星

作者机构：

关键词： PPV;PRV;PCV2;多重二温式PCR

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2012 年 02 期

页码： 60-64

收录情况： 北大核心

摘要： 通过对GenBank发布的猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核苷酸序列进行比对分析,找出PPV的VP2基因,PRV的gH基因和PCV2的ORF2基因的相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计高溶解温度引物,将常规三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,通过对PCR反应条件的优化,确定最佳引物浓度、最佳聚合酶浓度、最佳退火温度以及最佳反应体积,建立了多重二温式PCR方法检测PPV、PRV和PCV2,其扩增的目的片断大小分别为PPV(142 bp)、PRV(300 bp)和PCV2(469 bp),从而节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对PPV、PRV和PCV2 3种猪主要DNA病毒进行检测。用30份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为95%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有高度特异、快速、敏感等特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。

分类号： S858.28

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