A型流感病毒NP蛋白双单抗夹心ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐菱

作者： 徐菱;张振宇;郭兴;于萌萌;王晓钧

作者机构：

关键词： A型流感病毒;NP蛋白;双单抗夹心ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 42 卷 006 期

页码： 572-578

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立广谱型A型流感病毒(IAV)快速检测方法,本研究选用流感病毒中高度保守的核糖核蛋白(NP)为抗原,采用真核表达系统纯化NP蛋白,并免疫小鼠,按常规方法制备IAV NP蛋白单克隆抗体(MAb).以制备的SC06 MAb作为捕获抗体,XJ04 MAb作为检测抗体,经条件优化,建立了检测IAV NP蛋白的双单抗夹心ELISA方法.结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为2 mg/mL,0.1μg/孔,检测抗体浓度为1 mg/mL,0.05μg/孔,NP蛋白浓度在6.07 ng/mL~101.57 ng/mL时与OD450nm呈良好的线性关系,相关系数R2>0.99.该双单抗夹心ELISA方法可以特异性检测多个亚型IAV,特异性强;与血凝试验相比,该双单抗夹心ELISA方法具有很高的灵敏度,可以检测到20 ng/mL的病毒NP蛋白;批内和批间重复性变异系数均小于8%,重复性好.利用本研究建立的双单抗夹心ELISA方法与RT-PCR方法同时对28份马鼻拭子样品进行检测,结果显示二者总符合率为71.43%.本研究建立的ELISA方法可以用于甲型流感的快速诊断,也可为NP蛋白功能研究及定量检测提供技术支持.

分类号： S852.65

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