稳定表达绵羊肺腺瘤病毒受体Hyal-2蛋白细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘畅

作者： 刘畅;李磊;于立新;么宏强;周建华;马学恩

作者机构：

关键词： 绵羊肺腺瘤病毒;透明质酸酶-2;真核表达;NIH 3T3细胞系

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2014 年 36 卷 03 期

页码： 187-191

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3细胞系,本研究采用RT-PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hyal-2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA-Hyal2-HA。将该重组质粒转染NIH 3T3细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达JSRV受体蛋白Hyal-2的NIH 3T3细胞系。qPCR、间接免疫荧光及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,Hyal2-HA在NIH 3T3细胞中仍然能够稳定表达,并且主要分布于细胞膜上。JSRV囊膜蛋白诱导细胞转化试验显示,该蛋白的瞬时表达可以导致NIH 3T3细胞出现转化聚积灶,但失去了对稳定表达绵羊Hyal-2蛋白NIH 3T3细胞系的诱导转化作用,其作用机制尚待阐明。该细胞系的建立为进一步研究JSRV与其受体的相互作用致瘤机制奠定了基础。

分类号： S852.654

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