猪轮状病毒(G9型)TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王宇飞

作者： 王宇飞;时洪艳;朱向东;陈建飞;袁婧;张鑫;石达;刘建波;王潇博

作者机构：

关键词： 轮状病毒;G9基因型;VP7基因;Taq Man荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2015 年 37 卷 11 期

页码： 846-849

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型Po RV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的Po RV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87%,稳定性高,重复性好。对疑似感染Po RV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4%)高于普通RT-PCR(44.4%),两者总符合率为80%。本研究建立的方法为Po RV的流行病学调查和早期诊断奠定基础。

分类号： S852.651

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