基于RAA-CRISPR/Cas13a的鲤春病毒血症病毒快速检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张磊

作者： 张磊;王津津;廖立珊;薛霖朗;吴江;朱鹏;张子怡;辛卓润;朱裕敏;孙敬锋;姜敬哲;刘荭;孙洁

作者机构：

关键词： 鲤春病毒血症病毒;恒温扩增;CRISPR;重组酶介导等温核酸扩增技术

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2025 年 46 卷 006 期

页码： 241-248

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus, SVCV)是一种高致病性病原，对鲤科鱼类造成巨大危害，被世界动物卫生组织列为必须通报疫病。2002年，鲤春病毒血症(spring viremia of carp,SVC)在中国首次检出后，迅速在全国蔓延，给我国鲤鱼养殖业造成巨大威胁。因此，我国农业农村部将其列为二类动物疫病。迄今为止，早期、快速、准确的诊断仍然是控制其传播和流行的重要手段。本研究基于CRISPR/Cas13a系统结合重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification, RAA)，通过对GenBank上登录的SVCV全基因序列比对，针对SVCV聚合酶L基因高度保守的区域设计了一组RAA扩增引物和相应cr RNA；建立了一种可用于SVCV现场快速检测的RAA-CRISPR/Cas13a的方法，可以覆盖SVCV的4种不同基因型(Ia、Ib、Ic和Id)。按照世界动物卫生组织推荐的检测方法验证程序，经实验验证该检测方法有较好的重复性，最低检出限为115 copies/μL，与其他病原之间不发生交叉反应。通过对实验室分离保存的60份来自进出境水生动物疫病监测、国内重大水生动物疫病监测以及攻毒实验的样本进行检测，RAA-CRISPR/Cas13a检测结果与实时荧光定量PCR、套式RT-PCR和病毒分离培养结果完全一致，诊断灵敏度和诊断特异性均达到100%。采用本研究建立的方法在4个不同实验室开展比对，在相同条件下对20份样本进行检测，4个实验室的检测结果一致。结果表明，本研究建立的方法重现性良好，为首次采用CRISPR-Cas13a系统进行SVCV检测的研究，对SVCV快速诊断和防控具有重要现实意义。

分类号： S943

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