木薯MeSWEET10a基因启动子EBE区编辑载体的构建及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张彤

作者： 张彤;王亚杰;郭文雅;李瑞梅;刘姣;郭建春;胡新文;姚远;耿梦婷

作者机构： 海南大学;中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南热带农业资源研究院

关键词： 木薯;细菌性枯萎病;MeSWEET10a;CRISPR/Cas9

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 3120-3125

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 木薯细菌性枯萎病（cassavabacterialblight,CBB）是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种（Xanthomonasaxonopodis pv. Manihotis, Xam）引起的木薯重要病害,影响木薯产量,我国主栽的木薯品种均不抗Xam。Xam分泌的TAL20效应蛋白可结合木薯MeSWEET10a基因启动子的EBE区,激活该基因表达,促进糖类运输至Xam侵染的部位,为病菌的繁殖提供碳水化合物。本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0设计EBE区的基因编辑靶点,构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒pCAMBIA1301-Cas9-EBE-sgRNA。将重组质粒转化LBA4404根癌农杆菌,利用农杆菌介导法侵染木薯脆性胚性愈伤组织。提取侵染和未侵染的木薯脆性胚性愈伤组织DNA,PCR扩增靶点EBE区及潜在的脱靶位点,并进行Sanger测序分析编辑效果。结果发现EBE区被成功编辑,且没有脱靶现象。本研究有助于进一步获得MeSWEET10a基因启动子EBE区域的木薯突变体,以增强木薯抗细菌性枯萎病的能力。

分类号： S533

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