环介导等温扩增-CRISPR/Cas12b可视化检测志贺氏菌

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郑雨婷

作者： 郑雨婷;张行雨;王诗琪;王佳玲;张笑莹;廖洪艳;刘雪兰;胡青海

作者机构：

关键词： 志贺氏菌;食源性致病菌;核酸检测;环介导等温扩增

期刊名称： 食品安全质量检测学报

ISSN： 2095-0381

年卷期： 2025 年 16 卷 016 期

页码： 131-139

摘要： 目的 将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12b[clustered regularly interspaced short palindromic repeats and associated protein 12b,CRISPR/Cas12b]相结合,建立一种针对志贺氏菌的快速、可视化的检测方法。方法 根据志贺氏菌保守的侵袭质粒抗原H基因ipaH7序列,设计并筛选LAMP引物,建立LAMP检测志贺氏菌的方法。然后根据LAMP扩增片段的靶序列设计sgRNA,并筛选能特异性识别并激发Cas12b切割的sgRNA,最终建立了LAMP-CRISPR/Cas12b快速检测志贺氏菌的方法,并进行了特异性和灵敏度评价。结果 筛选出一组针对志贺氏菌ipaH7的LAMP扩增引物和sgRNA,建立了LAMP-CRISPR/Cas12b二步法检测志贺氏菌的方法,可在1 h内完成检测,最低检出限为1.1×10～1CFU/mL纯培养菌和1.1×10～1CFU/g加标的猪肉样品,且与其他病原体无交叉反应。结论 本研究成功建立了一种快速、灵敏、可视化的检测方法,可实现对食品中志贺氏菌的精准检测。

分类号： TS207.4

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