牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 路伟

作者： 路伟;张鹏;张杰;刘永生;卫广森;陈豪泰;姜海霞;朱小玲

作者机构：

关键词： 牛PrP~(27-30)基因;克隆;表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2007 年 29 卷 04 期

页码： 277-281

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP~(27-30)基因)。将PrP~(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP~(27-30) pPIC9K-boPrP~(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP~(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP~(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP~(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。

分类号： S852.65

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