牛源化脓隐秘杆菌溶血素的重组表达及其间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵宇

作者： 赵宇;周思旋;卢昱希;张涛;唐远江;陶小艳;赵春萍;黄波;武俊达;史开志

作者机构：

关键词： 牛;化脓隐秘杆菌;溶血素蛋白;原核表达;间接ELISA;抗体

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 75-80

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立检测牛源化脓隐秘杆菌抗体的间接ELISA检测方法,试验对分离的牛源化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因序列进行分析,截去信号肽与跨膜区域后进行碱基优化,合成PLO基因片段,连接至原核表达载体pET-30a中,转化至Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态后诱导表达并纯化,以纯化后的重组蛋白作为抗原包被96孔板,建立牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体间接ELISA检测方法,确定检测方法的临界值、特异性、敏感性、重复性,并用建立的方法对临床血清样本进行检测.结果表明:成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PLO,实现了重组蛋白在Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态中的表达,并建立了用于检测牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体的间接ELISA检测方法.该检测方法的临界值为0.354,与常见牛细菌阳性血清无交叉反应,阳性血清稀释至320倍检测仍高于临界值;批内、批间检测变异系数均小于5%;对10份已知阳性血清进行检测,阳性检出率为100%,80份临床牛血清的阳性检出率为21.25%(17/80).说明该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,可用于牛源化脓隐秘杆菌感染的快速检测与流行病学调查.

分类号： Q78%S852.4

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