猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 康雪燕

作者： 康雪燕;张莉;姜世金;张培君

作者机构：

关键词： 猪传染性胃肠炎病毒;纤突糖蛋白;巴斯德毕赤酵母;分泌表达

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2010 年 21 卷 02 期

页码： 222-226

摘要： 目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突糖蛋白S。方法:根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计一对引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点,2.2kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞,G418筛选鉴定阳性重组子,经甲醇诱导,SDS-PAGE检测诱导后上清。结果:对pPIC9k-S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因;重组酵母菌诱导表达后,SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量约为82×103,且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论:利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒(河北分离株)纤突糖蛋白S。

分类号： Q78

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