优化sgRNA提高塔宾曲霉基因编辑效率

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁丽存

作者： 梁丽存;王克芬;宋祖洹;刘梦婷;李佳玉;罗会颖;姚斌;杨浩萌

作者机构：

关键词： 塔宾曲霉;基因编辑效率;启动子;“lock”结构

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2025 年 41 卷 003 期

页码： 62-70

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】在CRISPR/Cas9基因编辑系统中，sgRNA是重要的基因编辑元件之一，它与Cas9蛋白结合并通过间隔区序列与基因组DNA互补，引导Cas9蛋白对基因组进行精准剪切。为了提高塔宾曲霉的基因编辑效率，对sgRNA进行优化是一项可行的策略。【方法】对sgRNA的启动子和发夹结构进行了优化，并在塔宾曲霉中进行了基因编辑效率的验证。【结果】通过RNP法进行基因编辑时，带有“lock”结构的sgRNA的基因编辑效率比对照组提高了9.37%;sgRNA在进行体内表达时，使用tRNAGly15和tRNAGly17启动子的基因编辑效率分别高出5S rRNA启动子14%-16%；使用tRNAGly15启动子表达带有“lock”结构的sgRNA，能提高白孢率，并使塔宾曲霉的基因编辑效率提高到96%。【结论】“lock”结构和两种tRNAGly15和tRNA Gly17启动子能够提高塔宾曲霉的基因编辑效率。

分类号： Q78

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