猪α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达
文献类型: 中文期刊
第一作者: 梁望旺
作者: 梁望旺;周丹娜;田永祥;伍锐;杨克礼;刘泽文;段正赢;邓均华;郭锐;袁秋云;徐涤平
作者机构:
关键词: 猪α干扰素;毕赤酵母;分泌表达
期刊名称: 湖北农业科学
ISSN: 0439-8114
年卷期: 2010 年 49 卷 11 期
页码: 2665-2668
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因,并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母(Pichia pastoris)-大肠杆菌(Escherichia coli)穿梭质粒pPIC9K载体中,构建分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFN-α。将SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母GS115株(组氨酸缺陷型),使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以G418抗性梯度法筛选多拷贝重组子。该多拷贝菌株经1%甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明,猪α干扰素在毕赤酵母中成功地获得了分泌表达,并具有免疫活性,表达产物约为19kD,这为进一步研究猪α干扰素的功能奠定了基础。
分类号: S852.5
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