柔嫩艾美耳球虫Serpin基因在293T细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晔

作者： 王晔;韩红玉;董辉;赵其平;朱顺海;姜连连;薛璞;舒凡帆;黄兵

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;Serpin基因;293T细胞;真核表达

期刊名称： 复旦学报(自然科学版)

ISSN： 0427-7104

年卷期： 2015 年 54 卷 02 期

页码： 252-256

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了检测柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因(EtSerpin)在真核细胞293T中的表达情况,以Et孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增含完整Serpin开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtSerpin质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtSerpin.该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞,用间接免疫荧光法和Western blot鉴定EtSerpin基因的表达情况,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光,Western blot结果显示出大小约45.5kDa的目的蛋白条带,结果表明构建的EtSerpin可以在293T细胞中获得表达.

分类号： S852.7

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