基于Qβ噬菌体的甲肝病毒装甲RNA标准参考样品的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姚琳

作者： 姚琳;逄凤娇;张奇;庞倩倩;李风铃;江艳华;王联珠;翟毓秀

作者机构：

关键词： 甲肝病毒;Qβ噬菌体;装甲RNA;标准参考样品;实时荧光RT-PCR

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 209-216

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】目前食品中甲肝病毒分子的检测缺乏安全、稳定的RNA标准参考样品,影响了检测结果的科学性与准确性。【目的】基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含甲肝病毒检测靶标的装甲RNA (Hepatitis A virus armored RNA,AR-HAV),并开展初步定值、均匀性、稳定性研究,为HAV分子检测提供标准参考样品。【方法】人工合成包含Qβ噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点、HAV检测靶标cDNA序列的核酸片段QGBHAV,并亚克隆到pET-28a(+)中构建重组质粒pET-QGBHAV,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析柱纯化AR-HAV后电镜观察。通过实时荧光RT-PCR对AR-HAV进行初步定值及均匀性和稳定性研究。【结果】SDS-PAGE结果表明重组质粒在大肠杆菌中有约14.1 kD的目的蛋白表达;纯化后的AR-HAV无杂蛋白和残留质粒;电镜下可见结构完整、大小约为25nm的病毒样颗粒;定值结果显示,AR-HAV中检测靶标RNA的含量为(2.57±0.12)×107 copies/μL;均匀性分析结果为F=1.23

分类号： R373

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