鸽微RNA病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张靖鹏

作者： 张靖鹏;陈翠腾;林琳;付环茹;李兆龙;江斌;黄瑜;万春和

作者机构：

关键词： 信鸽;鸽微RNA病毒;3C基因;序列分析;实时荧光定量RT-PCR方法

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 860-866

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立鸽微RNA病毒（pigeon megrivirus, PiMeV）实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物，从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性（命名为PiMeV-CHN001株）,并对其3C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析，明确其基因特征后，设计特异性实时荧光定量RT-PCR检测（RT-qPCR）引物组，建立检测PiMeV的RT-qPCR方法。结果显示：PiMeV-CHN001株3C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸，和其他2株野鸽源PiMeV（MeV-B1株和MeV-B2株）核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的RT-qPCR方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强，仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为（81.69±0.22）℃],对鸽源禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）、鸽源禽I型副黏病毒（pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1）、鸽输血传播病毒（pigeon torque teno virus, PTTV）、鸽腺病毒（pigeon adenovirus, PiAd）及鸽圆环病毒（pigeon circovirus, PiCV）检测均未见特异性扩增信号；敏感性优，最低检测限为54.0拷贝·μL-1;重复性好，批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测，发现2份阳性样品（阳性率为4.76%）。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息；建立的RT-qPCR方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。

分类号： S852.65

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