牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢建鹏

作者： 谢建鹏;陈平;王斐;何振富

作者机构：

关键词： 牦牛;载体构建;双荧光素酶;VEGFA基因;miR-200b

期刊名称： 寒旱农业科学

ISSN： 1001-1463

年卷期： 2023 年 2 卷 008 期

页码： 745-749

摘要： 为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系,采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点,构建了 VEGFA基因3'UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体.利用与目的miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列,构建该靶基因的突变型重组质粒(pGL3-promoter-mut VEGFA),再进行重组质粒和目的miRNA的miRNA mimic的共转染实验.结果表明,预测到的miR-200b与VEGFA基因的3'UTR区存在结合位点.PCR进行扩增和测序之后,VEGFA基因3'UTR区的野生型、突变型载体构建成功.共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组(P<0.05),VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异(P>0.05).说明VEGFA基因的3'UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性,验证了 VEGFA是miR-200b的靶基因.

分类号： S823.8

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