提高表达分选酶A的猪链球菌突变株的构建及初步评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱金鲁

作者： 朱金鲁;陈平;黄萌萌;刘冉;卫东;刘思国;张跃灵

作者机构：

关键词： 猪链球菌;分选酶A;提高表达;强启动子;胞壁锚定;细菌表面展示

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 43 卷 001 期

页码： 7-13

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了提高猪链球菌(Streptococcus suis,SS)05ZYH33菌株中分选酶A(SrtA)的表达量,本研究利用同源重组技术,将强启动子Peno、SrtA基因与红霉素抗性基因融合并转化05ZYH33野生菌株(05ZYH33-WT),构建SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,并对05ZYH33-srtAe突变株和05ZYH33-WT进行生长特性分析和SrtA蛋白的western blot检测;进一步构建SS SrtA基因缺失株05ZYH33-srtAΔ作为对照,通过检测05ZYH33-WT、05ZYH33-srtAe和05ZYH33-srtAΔ菌株表面蛋白SSU05_0630的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性,初步评价SrtA的提高表达在SS表面蛋白锚定中的作用.Western blot结果显示,正确构建了SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,且该菌株的生长速度和05ZYH33-WT基本相同,但SrtA的表达量却提高了2.4倍.菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性检测结果显示,05ZYH33-srtAΔ菌株的NAG活性和本实验室前期构建的SSU05_0630基因缺失株ssu05_0630Δ相同,检测不到SSU05_0630蛋白的NAG活性,表明SSU05_0630蛋白是SrtA的底物,通过SrtA锚定到SS的表面.05ZYH33-srtAe和05ZYH33-WT菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性无明显差异,即SrtA表达量的提高并没有提高SSU05_0630蛋白在SS表面的锚定量.本研究首次构建了提高SS SrtA表达量的突变株,并对SrtA表达量的提高是否对SS表面蛋白锚定产生影响进行了初步探究,为进一步研究SrtA表达量的提高对SS其他表面蛋白锚定量的影响,以及优化SS表面蛋白展示系统奠定了基础.

分类号： S852.61

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