猪γ干扰素的体外表达及其多克隆抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 闫丽萍

作者： 闫丽萍;周艳君;仇华吉;魏萍;童光志

作者机构： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;东北农业大学动物医学院

关键词： 猪γ干扰素;重组细胞因子;抗血清

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 04 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从健康仔猪前腔静脉无菌采血 ,分离外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,用猪γ干扰素 (IFN_γ)基因特异性引物通过RT_PCR扩增猪IFN_γ的全长cDNA序列 ,将其克隆到pMD18_T载体中 ,再亚克隆到pUC18和表达载体pET_30a中 ,经测序发现其序列与GenBank报道的IFN_γ基因序列基本一致。将重组质粒pET_30a_IFN_γ转化大肠杆菌BL2 1,于 37℃经IPTG诱导表达 ,IFN_γ基因获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 39%。经SDS_PAGE及Westernblot分析表明 ,表达的融合蛋白分子量约为 2 5ku。将包涵体用 8mol/L脲变性 ,用ProBondTMPurificationSysterm纯化 ,经透析复性 ,得到纯化的目的蛋白 ,含量可达 0 3mg/mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔三次 ,制备了高滴度的猪IFN_γ抗血清。本实验表达和纯化了猪IFN_γ ,并制备兔抗猪IFN_γ的抗血清 ,为下一阶段关于猪γ干扰素重组蛋白其应用奠定了基础。

分类号： S859.79

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