BF2/肽四聚体的构建及其在特异性T细胞检测上的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘光亮

作者： 刘光亮;王群;肖一红;童铁钢;白宇;孟庆文;吴东来

作者机构：

关键词： BF2/肽四聚体;传染性支气管炎病毒;核蛋白;特异性T细胞

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2009 年 17 卷 01 期

页码： 12-17

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建可溶性鸡组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子(BF2)/肽复合物,大量表达并纯化了可生物素化的MHCⅠ类分子重链(BF2-BSP)和轻链(Chβ2m),并合成了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白N71~78T细胞表位肽,将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性。复性后在快速蛋白液相色谱仪(FPLC)上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物。将该单体复合物在体外进行生物素化,其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物;然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白(PE)标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体。为了检测所制备BF2/肽四聚体是否能应用于检测特异性T细胞,从感染IBV H52株10 d后的SPF鸡分离外周血单核细胞(PBMC),染色后采用流式细胞术检测,结果表明,所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBV N蛋白特异性T淋巴细胞,检测1周龄SPF鸡接种H52后10 d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65%。

分类号： S854.43

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