猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王飞飞

作者： 王飞飞;刘珂;郇贝丽;魏建超;邵东华;李蓓蓓;邱亚峰;石元元;钱莺娟;马志永;JUNG Yong-Sam

作者机构：

关键词： 促血小板碱性蛋白;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 28-33

收录情况： 北大核心

摘要： 根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R2>0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。

分类号： S858.28

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