慢病毒介导过表达端粒酶逆转录酶的人口腔黏膜上皮稳定细胞系的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曾飒

作者： 曾飒;秦晓东;何祥一;车春晓;张潇;解斯羽;孙贵军;王立鹤

作者机构：

关键词： 口腔黏膜上皮细胞;人端粒酶逆转录酶;慢病毒载体;稳定表达;永生化

期刊名称： 华西口腔医学杂志

ISSN： 1000-1182

年卷期： 2016 年 05 期

页码： 443-447

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的通过慢病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶逆转录酶(h TERT)基因的口腔黏膜上皮细胞(OMECs),探索构建高效、稳定的永生化OMECs细胞系的方法。方法提取293T细胞总RNA,应用聚合酶链反应(PCR)法扩增h TERT基因全长,构建重组慢病毒载体p LVX-puro-h TERT。包装慢病毒颗粒后感染人正常OMECs,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测h TERT基因m RNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了p LVX-puro-h TERT过表达慢病毒载体并感染到OMECs中;感染细胞与正常OMECs形态相似,呈铺路石样生长;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,h TERT在感染细胞中高表达,与正常细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过慢病毒法成功建立了过表达h TERT的OMECs稳定细胞系,为构建高效、稳定增殖的人永生化OMECs细胞系奠定了实验基础。

分类号： R781

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