信号肽筛选优化提高耐热α-环糊精酶在枯草芽胞杆菌中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈龙军

作者： 陈龙军;林陈强;贾宪波;方宇;张慧;陈济琛

作者机构：

关键词： 信号肽;α-环糊精葡萄糖基转移酶;饱和突变;枯草芽胞杆菌

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2022 年 37 卷 003 期

页码： 414-422

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]探索嗜热α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis RIK1285)中的高效胞外表达条件.[方法]以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建信号肽文库,筛选获得9条表达效率更高的信号肽,其中citH信号肽引导分泌效率最高.在此基础上,为进一步优化α-CGTase的分泌表达,对信号肽citH的Gly2、Asn3及Thr4进行饱和突变,并比较不同突变体的引导分泌效率.[结果]突变体G2R-N3K-T4L-CGT的引导分泌效率最高,重组枯草芽胞杆菌的胞外α-CGTase活力高达(14.2±0.11 )U·mL?1,相比未突变信号肽[(9.6±0.29 )U·mL?1],分泌效率提高了47.9%;是野生菌株嗜热地芽胞杆菌Geobacillus caldoxylosilyticus.CHB1(0.66 U·mL?1)的21.5倍.重组 α-CGTase的最适反应pH值为6.0,最适反应温度为60 ℃,在50 ℃以内稳定;Mg2+、Ca2+对α-环糊精酶活性具有一定的激活作用.[结论]信号肽对环糊精酶在芽胞杆菌中的高效表达具有重要影响,为外源蛋白在芽胞杆菌中的表达提供一定借鉴.

分类号： Q786

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