香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T-DNA插入突变体的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 毛超

作者： 毛超;戴青冬;汪军;刘一贤;杨腊英;郭立佳;黄俊生

作者机构：

关键词： 香蕉枯萎病菌4号生理小种;B2菌株;农杆菌转化;GFP基因

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2013 年 44 卷 12 期

页码： 1985-1991

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】通过农杆菌介导的遗传转化(ATMT)方法,建立香蕉枯萎病4号生理小种的高效转化体系,构建病原菌的突变体库并进行筛选,为已突变基因提供分子标记,在分子水平上对香蕉枯萎病菌的功能基因进行深入研究。【方法】通过单因子变量(试验材料、真菌孢子浓度、农杆菌预诱导终浓度、IM诱导培养基pH、共培养介质、共培养时AS浓度、共培养温度)试验,研究影响农杆菌介导的遗传转化效率的关键因素,并通过形态观察与致病性试验筛选突变体。【结果】得到的最佳转化条件为:农杆菌预诱导浓度OD600=0.8,病原菌孢子浓度106CFU/mL,转化受体材料为分生孢子,共培养培养基pH 5.4,共培养温度25℃,共培养培养基中AS浓度200μmol/L,共培养介质为硝酸纤维素膜。通过条件优化,转化效率可达到800~900个转化子/106个孢子。【结论】通过农杆菌介导的遗传转化成功将GFP基因转入病原菌中并表达,构建了病原菌的T-DNA插入突变体库,并通过筛选得到多个表型和致病性发生变化的突变体,为香蕉枯萎病菌基因组功能注释的研究奠定了基础。

分类号： S436.681

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