农杆菌介导转化大丽轮枝茵的体系优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈天子

作者： 陈天子;袁洪波;杨郁文;刘蔼民;张保龙

作者机构：

关键词： 农杆菌;大丽轮枝菌;潮霉素;GFP;遗传转化;遗传稳定性;表型变异

期刊名称： 棉花学报

ISSN： 1002-7807

年卷期： 2011 年 23 卷 006 期

页码： 507-514

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了揭示大丽轮枝菌的遗传变异和致病机理,以含潮霉素为抗性筛选标记、绿色荧光蛋白GFP为报告基因载体,优化了农杆菌介导转化大丽轮枝菌的遗传转化体系,获得了大丽轮枝菌菌株V991和BP2含绿色荧光蛋白GFP的转化子,转化率达到100*10-6~550*10-6.优化的转化条件为:农杆菌以IM液体培养基调节浓度至OD600=0.2并预培养4h,然后与等体积的浓度为106个·mL-1的大丽轮枝菌孢子混匀,每皿取200 μL混合液涂于固体IM共培养基的纤维素膜上,25℃共培养60h,转移至固体PDA培养基上以头孢噻肟钠500mg· LZ+潮霉素B 50 mg·L-1进行筛选.研究发现农杆菌LBA4404和AGL-1比农杆菌SK1044和EHA105更适用于大丽轮枝菌转化.对转化子观察和鉴定发现:从表型上,70.8%转化子保持野生型形态,29.2%转化子发生了形态变化;从致病力上,81%转化子的致病力相对于野生型没有发生显著变化,19%转化子的致病力或增强或减弱.

分类号： S435.621

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