尘螨变应原Der f1全序列的原核表达及生物信息学分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔玉宝

作者： 崔玉宝;周鹏;彭明;彭江龙;周鹰

作者机构：

关键词： 尘螨;Der f1;原核表达;生物信息学

期刊名称： 四川动物

ISSN： 1000-7083

年卷期： 2008 年 27 卷 01 期

页码： 37-43

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的构建尘螨变应原Der f1原核表达体系,并了解其分子特征。方法提取粉尘螨总RNA,用RT-PCR合成Der f1编码基因,将其克隆至pMD19-T载体,亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达。用生物信息学软件对测序结果进行分析并预测其空间结构。结果从粉尘螨总RNA中扩增获得Der f1 cDNA片段,成功构建了表达质粒pET-28a(+)-Der f1,Western blotting显示原核表达获得成功。测序结果提交GenBank,登陆号为EU095368,该基因长966 bp,与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸321个,属疏水蛋白,位于细胞外,信号肽位于1~18氨基酸处。同源性分析提示Der f1和Eur m1相似率为88%,而Der f1和Der p1的相似率为77%,分子进化树中粉尘螨和梅氏嗜霉螨聚成一簇。Der f1的二级结构由α-螺旋(109 aa,33.96%)、延伸链(55aa,17.13%)、β-转角(18 aa,5.61%)和随机卷曲(139 aa,43.30%)组成。结论尘螨变应原Der f1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。生物信息学分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合。

分类号： Q96

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