A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测
文献类型: 中文期刊
第一作者: 刘畅
作者: 刘畅;卢清侠;杨继飞;王世红;王寅彪;郭官鹏;邓瑞广;张改平
作者机构:
关键词: A型口蹄疫病毒;VP1蛋白;原核表达;蛋白纯化;活性鉴定
期刊名称: 西北农业学报
ISSN: 1004-1389
年卷期: 2013 年 22 卷 09 期
页码: 7-12
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。
分类号: S852.65
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