小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李剑峰

作者： 李剑峰;张跃强;樊哲儒;王岩军;王浩;曲延英;范玲

作者机构：

关键词： 小麦叶片;cDNA-AFLP;预扩增;选择性扩增;体系优化

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2010 年 47 卷 03 期

页码： 489-494

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)1.0μLd、NTP(2.5 mM)1.8μL、Mg2+(25 mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)0.6μL、dNTP(2.5 mM)2.0μL、Mg2+(25 mM)1.6μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcriptderived fragments)。【结论】试验通过对引物、dNTP、Mg2+、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础。

分类号： S512.1

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