罗非鱼AMH基因的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 丁炜东

作者： 丁炜东;曹哲明;曹丽萍

作者机构：

关键词： 奥利亚罗非鱼;抗苗勒氏管激素;原核表达;抗血清;纯化

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2010 年 34 卷 05 期

页码： 11-18

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 抗苗勒氏管激素(anti-mullerian hormone,AMH),也称苗勒氏管抑制物质(mullerianin hibiting substance,MIS),为肽类生长因子,属于TGF-β生长和分化因子家族。为研究AMH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用,应用DNAstar软件分析罗非鱼AMH基因的抗原性,选择抗原性较强的22～243氨基酸作为目的片段构建了AMH的原核表达载体并进行融合表达。首先利用RT-PCR方法从性腺中扩增出长约663bp的目的序列AMH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pGEX-5x-1中构建重组表达质粒pGEX-AMH,并在大肠杆菌BL21中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的38.7%。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,GSTrap FF column柱层析后得到分子量为49ku单一条带的目的蛋白。目的蛋白经FactorXa酶切裂解,GSTrap FF column过柱纯化后得到纯化的AMH蛋白,分子量为26ku,浓度为2.6mg/mL。以每只20μg的剂量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对AMH蛋白的血清抗体应答,免疫组抗体水平显著高于空白组(P<0.05),且加强免疫第5周后抗体效价为0.672±0.411,达到高峰值,血清效价为1∶2000。试验结果表明表达产物具有免疫原性,可以刺激机体产生免疫应答。

分类号： Q786

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