宿主细胞磷酸甘油酸变位酶5调控A型流感病毒复制机制的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王雨琴

作者： 王雨琴;李奇兵;王波;王一涵;刘旭伟;单智博;王一晗;李梦雅;李呈军;陈化兰;姜丽

作者机构：

关键词： 流感病毒;复制;磷酸甘油酸变位酶5

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 009 期

页码： 885-894,922

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究宿主因子磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控A型流感病毒复制的机制，本研究设计并合成PGAM5 siRNA和阴性对照Scrambled siRNA(NC siRNA)，将二者分别转染A549细胞后，采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot(WB)检测该siRNA的干扰效果，利用细胞活力试剂盒检测下调PGAM5表达对细胞活力的影响。结果显示，与转染NC siRNA的阴性对照细胞相比，PGAM5 siRNA能够极显著抑制PGAM5在A549细胞中的转录及表达水平（P<0.001、P<0.01）且对细胞活力基本无影响。为探究PGAM5对流感病毒复制的影响，将PGAM5siRNA和NC siRNA分别转染A549细胞36 h后经流感病毒A/WSN/1933(WSN,H1N1)株感染，分别于感染后24 h、48 h及72 h收获上清经噬斑滴定测定各组细胞中的病毒滴度；分别于感染后3 h～5 h采用WB检测病毒各蛋白的表达水平。结果显示，与阴性对照细胞相比，随着感染时间的延长，转染PGAM5 siRNA细胞中的病毒滴度均极显著下降（P<0.001），尤其在转染后72 h病毒滴度下降最多；且该细胞中流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M1和NS1蛋白的表达水平均呈下降趋势，以感染后3 h上述蛋白表达水平的降低最为显著。为探究PGAM5调控流感病毒复制的机制，将PGAM5 siRNA和NC siRNA分别转染A549细胞，36 h后以MOI 10 WSN株感染细胞，1 h后分别采用WB检测病毒NP蛋白的表达水平，分析PGAM5对流感病毒吸附和内吞的影响，并于感染后0、3 h、4 h及5 h通过激光共聚焦试验检测细胞内病毒NP蛋白的定位，以确定下调PGAM5对流感病毒vRNP复合体入核及出核的影响，采用Image J统计含病毒NP蛋白的细胞在v RNP复合体入核及出核中的比例。结果显示，与对照组相比，下调PGAM5基因的表达后，吸附在细胞表面或内吞进入各组细胞中的病毒粒子中NP蛋白的表达水平均无显著差异。激光共聚焦观察可见，在下调PGAM5表达的细胞中，病毒NP蛋白先定位于细胞表面，再向细胞核内聚集，而后完成出核、最后定位在细胞质中，与阴性对照细胞结果一致；但在该组细胞中，病毒NP蛋白趋向出核以及完成出核的细胞比例均显著低于阴性对照细胞（P<0.05）。将p CAGGS、pCAGGS-PGAM5及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-Importin α1/3/5/7-Flag/PGAM5和pCAGGS-PGAM5、pCAGGS-Importin β1-Flag以及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-Importin β1-Flag分别转染HEK293T细胞，24 h后利用Co-IP试验检测PGAM5与核输入蛋白的相互作用；将pCAGGS-PGAM5、pCAGGS-NS2-Flag及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-NS2-Flag和pCAGGS-PGAM5、 pCAGGS-M1-Myc及pCAGGSPGAM5+pCAGGS-M1-Myc分别转染HEK293T细胞，24 h后经Co-IP试验检测PGAM5与核输出蛋白的相互作用。结果显示，PGAM5与核输入蛋白Importin α1/α3/α5/α7及Importin β1及核输出蛋白M1/NS2均无相互作用。提示，宿主因子PGAM5可能并非通过与M1/NS2的互作调控流感病毒vRNP复合体的出核。本研究首次报道宿主因子PGAM5可以促进流感病毒的复制，且其主要参与调控流感病毒vRNP复合体的出核过程。本研究为深入了解PGAM5蛋白功能奠定了研究基础，也为流感的防控提供了新思路。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]CAML蛋白对流感病毒复制调控机制的初步研究. 孔凡迪,王广文,严娅,温霞,王倩,赵玉辉,梁立滨,李俊平,李呈军,陈化兰,姜丽. 2021

[2]H7N9流感病毒人源分离株与禽源分离株复制特性研究. 郭晶,李媛媛,裴兰英,邓国华,施建忠,陈化兰,李旭勇. 2018

[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒3''-UTR碱基缺失对病毒复制影响的初步研究. 熊俊垚,赵款,于芳,杨勇博,田志军,蔡雪辉,安同庆. 2019

[4]HgN2亚型禽流感病毒的序列分析及对哺乳动物致病力研究. 王金良,李旭勇,范俊,郭晶,邓国华,施建忠,陈化兰. 2013

[5]Sec62/Sec63复合物对乙型脑炎病毒在HEK-293细胞中复制影响的研究. 王晗,刘靖,钟杰,步志高,华荣虹. 2020

[6]MicroRNA-98促进猪圆环病毒2型在3D4/21细胞中的复制. 王小敏,徐祥兰,徐鹏,王兴开,惠禄露,范红结,何孔旺. 2020

[7]疱疹病毒的示踪技术:看到了什么?还能看到什么?. 王亚林,仇华吉,孙元. 2018

[8]Gα12蛋白抑制口蹄疫病毒在PK-15细胞上复制. 王志芳,张伟,杨帆,魏婷,郑海学. 2020

[9]HeLa细胞中泛素蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响. 曲昱蓉,詹媛,仇旭升,谭磊,孙英杰,宋翠萍,丁铲. 2014

[10]两株EA H1N1亚型猪流感病毒在豚鼠体内的复制和传播能力评估. 陶世宇,王增,陈艳,杨焕良,孔晖晖,陈化兰,胡永浩. 2016

[11]H9N2亚型禽流感病毒的序列分析及对哺乳动物致病力研究. 王金良,李旭勇,范俊,郭晶,邓国华,施建忠,陈化兰. 2013

[12]不同H5N1亚型禽流感病毒在豚鼠体内的复制和传播能力评估. 张莹,高玉伟,邓国华,姜永萍,樊树芳,钟功勋,关云涛,陈化兰. 2010

[13]非洲绿猴FILIP1L真核表达质粒的构建及其抑制PEDV复制的研究. 汤学超,李运川,张雪寒,范宝超,朱雪蛟,周金柱,赵永祥,郭容利,李彬,李鹏. 2023

[14]禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究. 邓小芸,祁小乐,高玉龙,高宏雷,秦立廷,高立,王笑梅. 2010

[15]弓形虫Tgcsp2基因敲除株的表型和毒力. 牛美容,李法财,谢世臣,聂兰碧,朱兴全,赵光辉. 2020

[16]植物抗病基因的进化. 庄军,刘志昕. 2004

[17]组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小反刍兽疫病毒复制的影响. 潘春容,邓瑞雪,胡林杰,朱学亮,孙跃峰,王桂荣,蒙学莲. 2022

[18]新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析. 吴寒光,孙军峰,梁雨萌,刘胜旺,李海. 2020

[19]表达PRRSV强弱毒Nsp2的Marc-145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响. 王凤雪,刘准,温永俊,冷雪,李真光,武华. 2012

[20]miR-M11基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响. 王伟东,滕蔓,郑鹿平,刘金玲,张文凯,李林燕,张志会,樊剑鸣,罗俊. 2023

作者其他论文 更多>>

微信小程序