兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

文献类型: 中文期刊

第一作者: 李腾

作者: 李腾;姜平;王芳;宋艳华;胡波;范志宇;魏后军;仇汝龙;刘星

作者机构:

关键词: 兔出血症病毒(RHDV);VP60P2亚区;免疫共沉淀;层黏连蛋白受体(LamR)

期刊名称: 畜牧兽医学报

ISSN: 0366-6964

年卷期: 2016 年 47 卷 03 期

页码: 549-558

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。

分类号: S852.65

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