地黄花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用

文献类型: 中文期刊

第一作者: 秦艳红

作者: 秦艳红;鲁书豪;文艺;高素霞;李绍建;刘玉霞;王飞;鲁传涛

作者机构:

关键词: 地黄花叶病毒;反转录环介导等温扩增(RT-LAMP);快速检测

期刊名称: 植物保护

ISSN: 0529-1542

年卷期: 2024 年 50 卷 006 期

页码: 246-253

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 基于反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)技术建立了针对地黄花叶病毒(Rehmannia mosaic virus, ReMV)的快速、特异、灵敏的RT-LAMP检测方法。根据ReMV外壳蛋白(coat protein, CP)基因的核苷酸序列设计了3组LAMP引物,通过引物筛选确定最佳引物组合;利用电泳检测及可视化方法(加SYBR GreenⅠ显色剂)进行RT-LAMP温度优化、特异性检测、灵敏度比较。结果表明:本研究建立的RT-LAMP方法最适检测温度为60℃,优化后的LAMP方法能特异性检测ReMV,灵敏度是常规PCR的1 000倍,可检测到1.2×10-1拷贝/μL的模板浓度。对60份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的阳性检出率为98.3%,高于常规RT-PCR方法(75%)。本研究建立的RT-LAMP检测技术为ReMV的准确检测提供了快速、高效的方法。

分类号: S435.672

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