桔梗ISSR反应体系的建立和优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于营

作者： 于营;郭靖;王志清;邵财;张庆田

作者机构：

关键词： 桔梗;ISSR-PCR;正交设计;体系优化;引物筛选

期刊名称： 时珍国医国药

ISSN： 1008-0805

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 1396-1399

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的建立并优化桔梗ISSR-PCR反应体系和扩增程序。方法采用正交试验和单因子试验,对ISSR反应体系主要因子(dNTPs、Taq酶、引物、Mg2+、模板)进行筛选。之后通过单因子试验,进行引物退火温度、循环次数的筛选。结果桔梗ISSR-PCR的最佳反应体系(20μl)为:dNTPs 0.25mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.30μmol/L、Mg2+1.50mmol/L、模板DNA10ng。利用此反应体系从54条引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,确定了引物UBC853[序列为(TC)8RC]的最佳退火温度为55℃和循环次数为45次。结论建立的桔梗ISSR-PCR反应体系,经过白、紫花桔梗共20份样品检验,证明该体系具有稳定性和可靠性,可用于桔梗遗传多样性研究。

分类号： S567.239

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