抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张付凯

作者： 张付凯;乔亚奇;王磊;兰丽平;潘家荣

作者机构：

关键词： Ω序列;四价抗体;原核表达

期刊名称： 核农学报

ISSN： 1000-8551

年卷期： 2012 年 26 卷 01 期

页码： 118-122+175

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。

分类号： Q78

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