分子伴侣对A型FMDV结构蛋白VP1在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔颖磊

作者： 崔颖磊;刘运超;冯华;刘畅;王彦伟;杨棋;王冬雨;张改平

作者机构：

关键词： 分子伴侣;VP1蛋白;原核表达;可溶性表达

期刊名称： 河南农业大学学报

ISSN： 1000-2340

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 350-355

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得具有活性的A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1蛋白,以重组质粒pUC57-MM-VP1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV VP1基因片段,并将该片段插入原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET-28a-MM-VP1;之后将该质粒转入E.coli BL21(DE3)进行诱导,同时对诱导温度进行了优化。SDSPAGE显示,最佳诱导温度为18℃,VP1蛋白主要以包涵体形式高效表达;为了提高VP1蛋白可溶性表达,将重组质粒pET-28a-MM-VP1与pTF16共同转入E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达条件进行优化。结果表明,分子伴侣有效提高了A-VP1重组蛋白的可溶性表达量,诱导最佳条件为18℃、0.1 mmol·L~(-1)IPTG、2 g·L~(-1)阿拉伯糖、诱导时间20 h。Western-Blot结果表明,得到的重组蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,反应原性良好。

分类号： S852.65

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