高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王凤雪

作者： 王凤雪;师新川;温永俊;胡嘉欣;刘准;武华

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;非结构蛋白2;RNA干扰

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2012 年 05 期

页码： 132-137

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。

分类号： S852.65

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